齊昭一係推崇扶桑皇室終於釀成了苦果——當然，齊昭等人可能還誌得意滿，認為這是堅持了自身主張、終於對與之不和的幕府老中們做出了反擊。
安政五年（1858年）三月，廷臣八十八卿列參事件終於發生了：
出於對開國通商的恐懼，在獲得齊昭一係的支持後，京都小朝廷拒絕了幕府申請的赦許，正式對《扶桑米人通商約定》說不！
以公卿久我建通、中山忠能、三條實愛、岩倉具視、大原重德等人為首，八十八位所謂的堂上公家集體當麵向皇室請命，之後又有一百五十餘中下級公卿上書聲援，最終使幕府首席老中堀田正睦等人無功而返。
自德川幕府建立以來，這是二百多年來重未發生的大事——京都小朝廷第一次明確拒絕了幕府的重大請求！
因此事幕府的權威受到了重大的打擊。
但出於左右逢源的想法，扶桑小朝廷並沒有徹底倒向齊昭一邊——在繼嗣問題的內敕上並沒有體現出傾向。
四月二十一日，出使京都的堀田、川路、岩瀨等人回到了江戶，得知結果的幕臣紛紛嘩然，“一向軟弱的小朝廷居然拒絕赦許，誰給他們的膽子！”
因此矛頭自然指向了一直號召尊崇皇室的齊昭一係，而且相當多的“忠義”幕臣開始對堀田一係不滿，認為其過於軟弱才給別人留下了可乘之機。
四月二十三日，不滿齊昭一係的幕臣聯合起來，將彥根藩主井伊掃部頭直弼推舉為“大老”——根據傳統，大老是幕府在非常時期設立的役職，僅設一人，統轄政務、決策機要，位在老中之上。
在此之前，幕府一共有十一任大老，而任命都發生在幕政動**不安之時。而之前井伊家已經出了六任大老，並且在任上都有所作為，因此新任的直弼被視為挽救幕政危局的希望。