公元前333年秋，亞曆山大侵入了敘利亞。亞曆山大的軍隊在品那洛斯河畔伊蘇斯城附近和波斯軍隊展開了第二次大戰。波斯國王大流士三世親自參加了這次戰役。大流士三世率領號稱60萬的大軍迂回到亞曆山大後方，擺開陣勢，準備以逸待勞。
戰前，亞曆山大召開軍事會議，進行動員。他分析了馬其頓進行這場戰役的有利條件，曆數了各個將領在過去戰爭中的英雄業績。並強調了這次戰役的重要性。據說，亞曆山大講完之後，將領們把他圍起來，向他歡呼，要求趕快進軍。
兩軍接近了，亞曆山大部署好方陣，乘馬在陣前飛馳，號召將士們“要做忠勇的男子漢”，高喊他們的姓名，官兵們則大聲向他呼應。一進入敵方弓箭射程之內，亞曆山大發揮了他大膽果斷的軍事才能，集中優勢兵力，以神速行動，渡河突破波斯軍隊的左翼，直搗中鋒。波斯軍隊沒有能夠利用各種有利的形勢，當亞曆山大率領著精銳的馬其頓騎兵勇猛衝過來的時候，有些抵擋不住了。大流士三世首先害怕起來，棄車上馬，倉皇而逃：由於主帥脫逃，中軍動搖，其他各部也就敗下陣來。經過一場激烈的廝殺，波斯軍隊丟槍棄甲，各自逃生，全軍迅速崩潰，據說波斯軍隊有10萬人死於此役。亞曆山大乘勝突人大流士的軍營，虜獲大批財寶、戰車和武器，大流士的母親、妻子（同時也是他的妹妹）和眷屬（包括兩個女兒）都落入亞曆山大之手，做了俘虜。第二天，亞曆山大召集軍隊，為馬其頓軍隊的死者舉行了葬禮，表揚了戰鬥中的立功人員，根據他們的功勞大小，發給適當獎品，以資鼓勵二
伊蘇斯之役以後，亞曆山大繼續向南進軍。許多腓尼基沿海的城市都不戰而降，隻有推羅進行堅決抵抗。本來，推羅已主動表示降服亞曆山大，但考慮到戰爭尚未成最後定局，希望馬其頓人和波斯人都不要進入該城。這一下亞曆山大可找到了進攻推羅的借口？自從馬其頓軍隊登上亞洲大陸後，雖取得了幾次陸戰勝利，但波斯海軍尚完整無損，這支力量如果和希臘的反馬其頓力量結合起來，將對這次遠征構成嚴重威脅。因此亞曆山大決定借這個機會向推羅開戰，以消滅波斯海軍，奪取製海權。推羅位於愛琴海東南麵的一座小島上，與大陸隔著一條不太寬的海峽，擁有一支相當強的艦隊，城牆用石頭砌成，高大堅固，人民抗戰情緒十分高漲，因此要攻下這座城不是件容易的事。公元前332年，亞曆山大經過7個月的圍攻，使用了一切享有盛名的攻城武器：撞槌、攻城塔、巨大的穿城螺旋鑽，加上塞浦路斯海軍和波斯海軍中最強大、最精銳的腓尼基海軍轉向馬其頓方麵，最後終於攻陷這座城市。推羅軍民慘遭殺害，8000人陣亡、3萬人被賣為奴隸。